fa استخراج و خالص‌سازی آنزیم تریپسین از روده ماهی سفید (Rutilus frisii kutum) و محاسبه پارامترهای سینتیک و نیمه عمر آن بيوتكنولوژي و فرآوري هاي شيلاتي بيوتكنولوژي و فرآوري هاي شيلاتي پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">در دهه‌های اخیر بازیافت و شناسایی آنزیم های گوارشی از ماهیان توجه زیادی را به خود جلب کرده است و کاربردهای جدیدی نیز برای این آنزیم ها در برخی از صنایع</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">،</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> از قبیل صنعت غذا و صنایع شوینده تعریف شده است. یکی از این آنزیم‌های استخراجی تریپسین است که در این پژوهش با استفاده از روش سه مرحله‌ای استخراج با بافر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">Tris&ndash;HCl</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> 50 </span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">میلی مولار (حاوی 10</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> میلی مولار</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">CaCl₂ </span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;با </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">pH</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> 5/7)، ترسیب با سولفات آمونیوم60% اشباع و کروماتوگرافی غربالی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">Sephadex G-75</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> از روده ماهی سفید استخراج و خالص‌سازی شد و در نتیجه آن بازده 52% و میزان تخلیص </span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">78/25 برابر</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">fold</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">) بدست آمد. پارامترهای سینتیکی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">V_max</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">K_m</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> با استفاده از معادله میکائیلس-منتن برای سوبسترای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">BAPNA</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> بترتیب 9958/2 میکرومول بر میلی‌گرم در دقیقه</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">و </span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">5350/0 میلی‌مول محاسبه گردید و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">Kcat</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> نیز </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">S^-1</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">2568/6</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;بدست آمد. نیمه عمر تریپسین روده ماهی سفید نیز با استفاده از تبدیل نمودار فعالیت آنزیم (دقیقه) به نمودار لگاریتم طبیعی و محاسبه شیب آن برابر با 72/58 دقیقه برای سوبسترای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">BAPNA</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> محاسبه شد. نتایج نشان داد که تریپسین روده ماهی سفید با سهولت و هزینه کم قابل جداسازی و خالص‌سازی است و از لحاظ سینتیکی </span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">کارایی</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">بالاتری</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">نسبت</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">به تریپسین تجاری (خوک) دارد و</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">قابلیت استفاده را در صنایع</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">غذایی، صنایع شیلات، تهیه محیط کشت میکروبی</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">و</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">همچنین کاربرد درتحقیقات بیوتکنولوژی</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">دارد.</span></span><strong><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span></strong></div> <div style="text-align: justify;">In recent decades, recovery and identification of digestive enzymes from fish has attracted much attention and new applications for these enzymes have been defined in some industries, such as the food and detergent industries. One of these recovered enzymes is Trypsin, which in this study was extracted and purified from the intestine of Caspian kutum using a three-step extraction method with 50 mM Tris-HCl buffer (containing 10 mM CaCl₂ pH 7.5), 60% ammonium sulfate precipitation and Sephadex G-75 gel chromatography. The Result was an enzyme with 52% yield and a purity of 25.78-fold. The kinetic parameters of V_maxand K_m for BAPNA substrate were calculated using the Michaelis-Menten equation and were 2.9958 &micro;mol/mg.min and 0.5350 mM respectively and K_cat was 6.2568 S^-1. The kutum Trypsin&rsquo;s half-life was also calculated as 58.72 min for BAPNA substrate using the conversion of the enzyme activity graph (in minutes) to natural logarithmic graph and determining its slope. The results showed that it is easy and economical to extract and purify Trypsin from intestine of Caspian kutum and it is kinetically more effective than commercial Trypsin. It is suitable for use in the food industries, fish processing industry, culture media production as well as application in biotechnology research.</div> ماهی سفید, تریپسین, نیمه عمر, BAPNA kutum, Trypsin, Half-life, BAPNA 101 110 http://isfj.ir/browse.php?a_code=A-10-963-1&slc_lang=fa&sid=1 Z. Hasebi زهره حاسبی zhasebi@yahoo.com 1729876323 100319475328460026639 No Department of Food Science and Technology, Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University گروه علوم و صنایع غذایی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی ساری A. Motamedzadegan علی معتمدزادگان amotgan@yahoo.com 100319475328460026640 100319475328460026640 Yes Department of Food Science and Technology, Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University, Sari, Mazandaran, Iran گروه علوم و صنایع غذایی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی ساری R. Madani رسول مدنی madanirasool@gmail.com 100319475328460026641 100319475328460026641 No Department of Biotechnology, Razi Vaccine and Serum Research institute, Agricultural Research Education and Extension Organization (AREEO) گروه بیوتکنولوژی مؤسسۀ تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی A. Zamani عباس زمانی a.zamani@malayeru.ac.ir 100319475328460026642 100319475328460026642 No Department of Fisheries, Faculty of Natural Resources and Environment, Malayer University گروه شیلات دانشکدۀ منابع طبیعی و محیط زیست دانشگاه ملایر