fa انتقال و بیان ژن GnRH نوترکیب ماهی در باکتری BL21 E. coli به منظور تولید هورمون نوترکیب بيوتكنولوژي و فرآوري هاي شيلاتي بيوتكنولوژي و فرآوري هاي شيلاتي پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">هورمون آزاد کننده گنادوتروپین (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GnRH</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">) یک نوروپپتید موثر در تنظیم فرآیند تولیدمثل در مهره‌‌داران می‌‌باشد. آنالوگ‌‌های مختلفی از این هورمون به فرم سنتتیک با نیمه عمرهای مختلف برای تکثیر مصنوعی آبزیان در بازار موجود می‌‌‌‌باشند. هدف از این تحقیق بررسی بیان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GnRH</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> نوترکیب در باکتری </span></span>&nbsp;<em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Escherichia coli</span></span></em><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">سویه </span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">BL21</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">به منظور تولید هورمون نوترکیب می‌‌‌‌باشد. در این تحقیق، توالی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">DNA</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> مربوط به پپتید </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GnRH</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> طراحی شده در وکتور بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pET28a⁺</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">کلون شد. واکنش زنجیره‌‌ای پلیمراز (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">PCR</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">) به کمک آغازگرهای اختصاصی صحت کلونینگ را نشان داد. وکتور نوترکیب </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pET28a⁺/GnRH</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> به باکتری بیانی </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">E. coli</span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"> BL21 (DE3)</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> انتقال داده شد و صحت انتقال با کلونی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">PCR</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> سنجیده شد و باند 186 جفت بازی حاصل از تکثیر ژن بر ژل آگارز مشاهده گردید. سپس برای بررسی بیان، باکتری نوترکیب در محیط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Luria Bertani</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">LB</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">) حاوی آنتی‌‌بیوتیک کانامایسین در دمای 37 درجه سانتی‌گراد کشت داده شد و با غلظت یک میلی‌‌مولار </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Isopropyl &beta;-D-1-thiogalactopyranpside</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">IPTG</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">) القاء شد و بعد از القاء، باکتری در دو دما و زمان مختلف شامل 6 ساعت در دمای 37 درجه سانتی‌‌گراد و 24 ساعت در دمای 20 درجه سانتی‌‌گراد قرار گرفت</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">.</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> میزان بیان به کمک الکتروفورز ژل </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">SDS-PAGE</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> تعیین شد. بررسی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">SDS-PAGE</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> نشان‌‌دهنده بیان پپتید بوده و باند هشت کیلودالتونی مربوط به پپتید مورد نظر بر روی ژل قابل مشاهده بود. همچنین میزان بیان پپتید در دمای 20 درجه سانتی‌‌گراد بیشتر از دمای 37 درجه سانتی‌‌گراد می‌‌باشد. با توجه به نتایج بدست آمده از تحقیق حاضر می‌‌توان نتیجه گرفت که هورمون </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GnRH</span></span><span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;"> قابلیت تولید در سیستم بیانی پروکاریوتی همانند اشریشیاکلی را دارد و پس از خالص سازی می‌‌تواند به‌‌عنوان یک همولوگ خاص برای درمان اختلالات تولید</span></span> <span style="font-family:b compset;"><span style="font-size:12.0pt;">مثلی در آبزیان معرفی گردد.</span></span></div> <div style="text-align: justify;">Gonadotropin releasing hormone (GnRH) is a neuropeptide known to regulate reproduction in vertebrates. Different analogues of synthetic GnRH are used to induce final sexual maturation in fish breeders. The purpose of this research was to evaluate the expression of recombinant GnRH (rGnRH) in <em>Escherichia coli</em> BL21 to produce recombinant hormone. In the present research, the sequence of DNA related to designed fish GnRH was cloned in pET28a⁺. The cloning was confirmed by polymerase chain reaction (PCR) and specific primers. Recombinant vector pET28a⁺/GnRH was transformed into the expression host, <em>E.coli</em> BL21 (DE3). The transformation was confirmed using colony PCR. The transformed bacteria were cultured in LB medium containing kanamycin antibiotic at 37&deg;C at overnight then, induced with 1 mM IPTG. After induction, the bacteria were cultured in two different times and temperatures including 37&deg;C for 6 h and 20&deg; C for 24 h. The protein expression was determined by SDS-PAGE analysis. A band of expected size (186 base pair) of amplification from the gene transmitted to the bacteria was detected on the agarose gel. The 8-kD band of peptide expression was observed in the SDS-PAGE gel and the expression level in 20&deg; C for 24 h was higher than 37&deg; C for 6 h.&nbsp; The result showed that GnRH from fish had the possibility of producing in the prokaryotic expression system and after optimization, it can be introduced as a specific homologous for the treatment of reproductive disorders in fish.<span dir="RTL"></span></div> GnRH, اشرشیاکلی, القای هورمونی, آبزیان GnRH, E.coli, Aquatic animals, Hormonal induction 137 147 http://isfj.ir/browse.php?a_code=A-10-1112-8&slc_lang=fa&sid=1 S. Mohammadzadeh صدیقه محمدزاده mohammadzadeh.sedigheh@yahoo.com 100319475328460025004 100319475328460025004 No Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری S. Yeganeh سکینه یگانه 100319475328460025005 100319475328460025005 Yes Fisheries Department, Faculty of Animal Sciences and Fisheries, Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University, Sari, Iran دانشکده علوم دام و شیلات دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری F. Moradian فاطمه مرادیان 100319475328460025006 100319475328460025006 No دانشکده علوم دام و شیلات دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری B. Falahatkar بهرام فلاحتکار 100319475328460025007 100319475328460025007 No دانشگاه گیلان S. Milla سلواین میلا 100319475328460025008 100319475328460025008 No دانشگاه لورین