fa مقاله علمی – پژوهشی:‌ مطالعه چهار روش مختلف استخراج پروتئین از موکوس پوست گاو ماهی میمونی دریای خزر (Neogobius fluviatilis Pallas, 1814) به ‌منظور غربالگری از طریق سنجش زیستی بيوتكنولوژي و فرآوري هاي شيلاتي بيوتكنولوژي و فرآوري هاي شيلاتي پژوهشي Research <div><span style="font-size:11pt"><span style="line-height:15.0pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black">استخراج پروتئین از موکوس پوست ماهی‌ها با هدف غربالگری مبتنی بر سنجش زیستی بسیار چالشی و متغیر است. در این مطالعه، چهار روش مختلف استخراج و تغلیظ پروتئین شامل استخراج فاز جامد (</span></span></span><span dir="LTR" style="color:black">SPE</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black">)<a href="#_ftn1" name="_ftnref1" title=""><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">[1]</span></span></span></span></span></span></a>، استون<a href="#_ftn2" name="_ftnref2" title=""><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">[2]</span></span></span></span></span></span></a>، تری کلرو استیک اسید-استون<a href="#_ftn3" name="_ftnref3" title=""><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">[3]</span></span></span></span></span></span></a> و متانول<a href="#_ftn4" name="_ftnref4" title=""><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span class="MsoFootnoteReference" style="vertical-align:super"><span style="font-size:11.0pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">[4]</span></span></span></span></span></span></a> با هدف بررسی کارایی آنها در الترافیلتراسیون و گرفتن قله‌‌های (</span></span></span><span dir="LTR" style="color:black">peaks</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black">) مناسب در کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (</span></span></span><span dir="LTR" style="color:black">HPLC</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black">) جهت سنجش فعالیت زیستی مورد مقایسه قرار گرفتند. داده‌های ارائه شده نشان می‌دهد که روش استخراج فاز جامد نسبت به سه روش مورد آزمایش دیگر بر حسب کمیت (میزان پروتئین تام) و کیفیت (پروفایل پروتئینی مشاهده شده در </span></span></span><span dir="LTR" style="color:black">SDS &ndash; PAGE</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black">) پروتئین‌های موکوس پوست گاو ماهی، برتری دارد. از سوی دیگر، به علت ماهیت هیدروفوبی موکوس اپیدرمی، سه روش استخراج با استون، متانول و تری کلرو استیک اسید/استون منجر به تجمع غیر قابل برگشت پروتئین‌ها گردید که الترافیلتراسیون، </span></span></span><span dir="LTR" style="color:black">HPLC</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black"> و به تبع آن سنجش فعالیت زیستی را غیر ممکن می‌سازد. در این مطالعه، بالاترین میزان پروتئین (4.676 میکروگرم بر میلی‌لیتر) (01/0></span></span></span><i><span dir="LTR" style="color:black">p</span></i><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black">) و بهترین پروفایل پروتئینی (13باند) مربوط به استخراج فاز جامد بود. همچنین این روش به ‌طور هم‌زمان منجر به استخراج، تغلیظ و تخلیص (پاکسازی) اولیه نمونه‌ها و در نتیجه، افزایش کارایی الترافیلتراسیون و </span></span></span><span dir="LTR" style="color:black">HPLC</span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" compset="" style="font-family:"><span style="color:black"> می‌گردد. بنابراین، برای جداسازی پروتئین‌ها و پپتیدهای فعال از نمونه‌های پیچیده زیستی مختلف (موکوس پوست ماهیان)، مناسب است.</span></span></span></span></span></span></span></span> <div>&nbsp; <hr align="left" size="1" width="33%" > <div id="ftn1"></div></div> </div> <span style="font-size:11pt"><span style="line-height:16.0pt"><span sans-serif="" style="font-family:Calibri,"><span style="font-size:12.0pt"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="color:black">Fish epidermal mucus protein extraction for bioassay-guided screening is challenging and variable. In this study, four different protein extraction methods, including acetone, trichloroacetic acid (TCA)-acetone, methanol, and solid-phase extraction (SPE), were investigated to study their efficiency in ultrafiltration and to obtain the appropriate peaks in HPLC to measure biological activities. The presented data shows that the solid phase extraction method is better than the other three tested methods in quantity (total protein yield) and quality (protein profile observed in SDS-PAGE) of proteins and peptides from the epidermal mucus of Caspian monkey goby. On the other hand, due to the epidermal mucus hydrophobic nature, all three extraction methods including acetone, (TCA)-acetone and methanol led to the irreversible proteins aggregation, makes ultrafiltration, HPLC, and consequently bioactivity screening impossible. In this study, the highest amount of protein (4.676 &mu;g/ml) (P<0.01) and the best protein profile (13 bands) were related to solid phase extraction. Also, this method simultaneously leads to the extraction, concentration, and initial purification of the samples and therefore improves the efficiency ultrafiltration and HPLC. Thus, we introduce this method for the isolation of active proteins and peptides from various complex biological samples, including fish epidermal mucus.</span></span></span></span></span></span> پپتیدهای فعال زیستی, غربالگری مبتنی بر زیست سنجی, موکوس پوست ماهی, استخراج پروتئین Bioactive peptides, Bioassay-guided screening, Fish epidermal mucus, Protein extraction 23 35 http://isfj.ir/browse.php?a_code=A-10-2489-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Akhavan-Bahabadi محمد اخوان بهابادی Akhavanm@ut.ac.ir 4432540801 100319475328460036794 Yes Iranian Fisheries Science Research Institute موسسه تحقیقات علوم شیلاتی کشور Hamed Paknejad حامد پاک نژاد hkolangi@gmail.com 100319475328460036795 100319475328460036795 No Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان Aliakbar Hedayati علی اکبر هدایتی marinebiology1@gmail.com 100319475328460036796 100319475328460036796 No Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان Mehran Habibi-Rezaei3 مهران حبیبی رضایی mhabibi@ut.ac.ir 100319475328460036797 100319475328460036797 No University of Tehran دانشگاه تهران